Takara：光激活熒光蛋白PAmCherry

近日TaKaRa旗下公司Clontech推出了光激活紅色熒光蛋白PAmCherry。PAmCherry是熒光蛋白mCherry的光激活突變體，因?yàn)榧せ詈蠛铣傻姆肿硬荒馨l(fā)出熒光，所以特別適合蛋白半衰期及蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)通路的確定。

PAmCherry是熒光蛋白mCherry的光激活突變體，特別適合蛋白半衰期及蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)通路的確定，因?yàn)榧せ詈蠛铣傻姆肿硬荒馨l(fā)出熒光。因此，您所觀察到的正是激活時(shí)蛋白分子的快照。通過光激活熒光蛋白，您還可以實(shí)時(shí)觀察蛋白的動(dòng)力學(xué)，如蛋白移位和降解等。

PAmCherry一般不發(fā)光，而在350-400 nm光下暴露一會(huì)兒之后，會(huì)發(fā)出紅色熒光。熒光蛋白的大激發(fā)波長(zhǎng)為564 nm，而大發(fā)射波長(zhǎng)為595 nm。檢測(cè)紅色熒光蛋白(如DsRed和mCherry)的濾光片就適用于PAmCherry。

Clontech目前提供了四種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位載體，能分別將PAmCherry定位到細(xì)胞膜、線粒體、肌動(dòng)蛋白或微管蛋白。另外，Clontech還提供質(zhì)粒和慢病毒形式的載體，讓您構(gòu)建自己的融合蛋白，將PAmCherry融合在N端或C端。

此外，Clontech還提供光轉(zhuǎn)換熒光蛋白Dendra2。它是來源于八放珊瑚(Dendronephthya sp)的單聚體熒光蛋白質(zhì)，其熒光可由綠色轉(zhuǎn)換成紅色。Dendra2的序列經(jīng)過優(yōu)化，在光轉(zhuǎn)換前后均發(fā)出明亮的熒光。

通過UV-紫外(360-420 nm)或藍(lán)**域(460-500 nm)的光照射，Dendra2的熒光可從綠色轉(zhuǎn)換成紅色。轉(zhuǎn)換之后，紅色熒光增強(qiáng)150-300倍，而綠色熒光降低10-15倍。因此，紅色-綠色熒光比值的增加產(chǎn)生了約400倍的對(duì)比度。

Dendra2熒光蛋白質(zhì)可同時(shí)示蹤激活后的蛋白質(zhì) (具有紅色熒光) 的運(yùn)動(dòng)和它取代未激活的蛋白質(zhì) (具有綠色熒光) 的行為。因此，Dendra2是示蹤蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài) (蛋白質(zhì)的移位、降解等) 和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)選定細(xì)胞行為的理想選擇。

Dendra2在20℃和37℃下發(fā)色團(tuán)成熟快，適用于廣泛的實(shí)驗(yàn)。哺乳動(dòng)物細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Dendra2 10-12個(gè)小時(shí)后，可檢測(cè)到均一分布的綠色熒光信號(hào) (例如沒有凝聚現(xiàn)象)。Dendra2 對(duì)細(xì)胞沒有毒性。