Invitrogen轉(zhuǎn)染試劑聚焦

說到轉(zhuǎn)染，invitrogen認**，沒人敢認**。Invitrogen一直保持著轉(zhuǎn)染市場的**地位，近幾年該公司又推出了一系列新產(chǎn)品。此文概述了幾種Invitrogen轉(zhuǎn)染試劑盒的特性和用途，以供參考。

高效轉(zhuǎn)染RNA——Lipofectamine? RNAiMAX

從初的sirna到如今的miRNA，隨著小分子RNA研究的持續(xù)升溫，研究人員也急需一種高效的RNA轉(zhuǎn)染試劑。于是，Invitrogen推出了Lipofectamine? RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑。它是一款RNAi特異的陽離子脂質(zhì)體試劑，可以高效地將小分子RNA導入多種細胞類型。

Lipofectamine? RNAiMAX 轉(zhuǎn)染試劑可以在10倍的濃度范圍內(nèi)獲得大的干擾效果以及**的細胞存活率，這個特點使得Lipofectamine? RNAMAX的轉(zhuǎn)染條件極易優(yōu)化，以便在實驗中使用低的siRNA濃度，從而降低細胞毒性。盡管Lipofectamine? RNAiMAX的說明書建議以10nM siRNA 作為優(yōu)化干擾效果的起始濃度，但是僅用1nM siRNA 也可以獲得較好的靶基因干擾效果。不過，這款試劑只能用于小RNA的轉(zhuǎn)染，不能用于共轉(zhuǎn)染。如果需要共轉(zhuǎn)染，只能借助經(jīng)典的Lipo 2000。

操作流程(順式轉(zhuǎn)染)：用opti-MEM分別稀釋RNA分子和Lipofectamine RNAiMAX，將兩者混合，室溫下孵育10-20分鐘。加入培養(yǎng)細胞中，在37°C孵育24-48小時。

Lipofectamine? RNAiMAX的價格約為：4315元/0.75 ml，7410元/1.5 ml。新推出的0.1 ml小包裝價格為738元。雖然目錄價看上去貴一些，但實際用量較省(24孔板的每孔建議用量為1 μl)，因此綜合來看性價比較高。

效率與溫和之間的佳平衡——Lipofectamine? LTX

對于某些對轉(zhuǎn)染試劑敏感的細胞系，L2K的毒性也是無法回避的問題。于是，Invitrogen推出了毒性較低的Lipofectamine? LTX。這也意味著在獲得高轉(zhuǎn)染效率和高蛋白表達的同時，無需擔心轉(zhuǎn)染后細胞的活力。

當然，轉(zhuǎn)染效率也是大家首要考量的因素，特別是在研究原代細胞、神經(jīng)細胞和干細胞這些難對付的細胞時。當然，Invitrogen也考慮到了。PLUS? 試劑就是一個秘密武器，讓大家在必要時候出手。Lipofectamine? LTX與PLUS? 試劑配合使用，可以完成難轉(zhuǎn)染的細胞和原代細胞的成功轉(zhuǎn)染，包括人類臍帶動脈細胞(HUVEC)、RAW267.3 巨噬細胞、神經(jīng)元細胞及人類間充質(zhì)干細胞。

轉(zhuǎn)染過程也非常簡單，無需去除轉(zhuǎn)染復(fù)合物，也無需在轉(zhuǎn)染后更換培養(yǎng)基。只需將質(zhì)粒DNA、Lipofectamine? LTX及PLUS?試劑加入細胞中，24小時之后，即可分析基因表達情況。

當然，還有一點需要特別注明，Lipofectamine? LTX試劑不能用于小分子RNA的轉(zhuǎn)染，這一點與L2K可不同。因此，在選擇質(zhì)粒與RNA的共轉(zhuǎn)染試劑時，還須選擇L2K。

還有一個好消息!以往，Invitrogen的轉(zhuǎn)染試劑只有0.75 ml/1 ml的包裝。對于某些不經(jīng)常做轉(zhuǎn)染，或者只想試一下的客戶來說，這個包裝太大了，于是他們便改投了Fugene的懷抱。Invitrogen當然也意識到了這個問題，不久前推出了0.1 ml的Lipofectamine? LTX & PLUS小包裝，價格約為528元。常規(guī)的1 ml包裝則為4800元。

如何對付百毒不侵的細胞——Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)

就普通的細胞系而言，傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑大多都能實現(xiàn)高效的轉(zhuǎn)染。然而，有些細胞“百毒不侵”，比如干細胞或原代細胞，你還真拿它沒辦法。無論怎么優(yōu)化，轉(zhuǎn)染試劑就是不靈。這時，不妨換個思路，試試電穿孔吧。

Life Technologies公司在2009年推出了一種新一代的電穿孔儀——Neon?轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。它可將核酸(包括質(zhì)粒DNA和siRNA)高效導入幾乎任意一種動物細胞內(nèi)，包括難以轉(zhuǎn)染的原代細胞、干細胞和造血系統(tǒng)來源的細胞，同時保持高的細胞活性。

新穎的轉(zhuǎn)染室

大家可能注意到，Neon系統(tǒng)中沒有帶傳統(tǒng)的電轉(zhuǎn)杯。確實，這就是它的獨特之處。Neon系統(tǒng)用一個特殊的移液器吸頭取代了傳統(tǒng)的電轉(zhuǎn)杯。移液器吸頭內(nèi)使用24K鍍金電極，可形成更為均勻的電場，同時大限度地減少溫度升高和pH值變化幅度，在確保細胞高效轉(zhuǎn)染的同時，也更為溫和，保證細胞存活率更高。

裝有鍍金電極的Neon移液器吸頭(右)與普通電轉(zhuǎn)杯(左)的比較。研究表明，與普通電轉(zhuǎn)杯相比，狹長形移液器吸頭可產(chǎn)生更為均勻的電場，從而提高細胞存活率和轉(zhuǎn)染效率。

高效轉(zhuǎn)染

實踐證明，Neon系統(tǒng)能夠?qū)Χ喾N難以轉(zhuǎn)染的細胞進行高效轉(zhuǎn)染，包括原代星形膠質(zhì)細胞、原代樹突狀細胞、Jurkat、小鼠胚胎干細胞等。多種細胞類型可獲得超過75%的轉(zhuǎn)染效率。覺得摸索電轉(zhuǎn)條件無從下手?別擔心，在轉(zhuǎn)染前，你只需登錄Neon的網(wǎng)頁(www.invitrogen.com/neon)，就能找到細胞特異的實驗條件，無需反復(fù)優(yōu)化，輕輕松松提高轉(zhuǎn)染效率和細胞活性。另外Life Tech還有一個專門供Neon客戶分享他們的實驗結(jié)果及經(jīng)驗的網(wǎng)站Neon Protocol Exchange(http://www.protocolexchange.com/index.jspa)，在這里有很多成功案例，供你參考。你也可以與大家分享你的成功案例。

設(shè)計靈活

有時，細胞很珍貴，若每次轉(zhuǎn)染所需的細胞量較少，那么你就能開展更多更復(fù)雜的實驗。Neon系統(tǒng)帶有兩種吸頭：10 μl和100 μl，讓您可根據(jù)實驗要求靈活選擇，而不像傳統(tǒng)電穿孔儀那樣只能轉(zhuǎn)染固定量的細胞。使用Neon系統(tǒng)，每次少可轉(zhuǎn)染2×104個細胞，多可轉(zhuǎn)染2×107個細胞。當然，這并非**。若你的細胞更少或更多，也可一試，據(jù)Life Tech的專家介紹，有一位客戶曾成功轉(zhuǎn)染了5000個原代毛囊細胞。

使用簡單

由于省掉了電轉(zhuǎn)杯，轉(zhuǎn)染過程也更為簡化：只需將細胞和核酸吸入Neon移液器吸頭中，再插入到移液器吸頭架上，并按“Start”即可。轉(zhuǎn)染過后，直接將細胞加入培養(yǎng)容器中。既沒有繁瑣的移液，也不需要清洗電轉(zhuǎn)杯。而且，通用的試劑盒適用于所有細胞類型，不用購買多個試劑盒，也無需鑒定佳緩沖液。當然，一次性使用的24K金電極吸頭成本不低。因多次使用會導致金包被變薄，改變吸頭的電導率，所以每個吸頭多只能使用兩次。

如何選擇轉(zhuǎn)染試劑?

如此多的產(chǎn)品可供選擇，當然是好事，不過估計也有不少同學會頭疼，不知該選哪個好。生物幫特地找來了Life Technologies的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品選擇表，以饗讀者。

(生物幫bio1000.com)