熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
1、分類
熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。
熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)，自動(dòng)記錄式熒光分光光度計(jì)，計(jì)算機(jī)控制式熒
光分光光度計(jì)三個(gè)階段;熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計(jì)，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計(jì)等。
2、基本原理
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。
物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光.
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。
3、基本結(jié)構(gòu)
(1). 光源：
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等，故較常用。
(2).激發(fā)單色器：
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或**單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。
(3).發(fā)射單色器：
置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或**單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
(4). 樣品室：
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時(shí)，光源與檢測器成直角安排;測量固體時(shí)，光源與檢測器成銳角安排。
(5). 檢測器：
一般用光電管或光電倍增管作檢測器?？蓪⒐庑盘?hào)放大并轉(zhuǎn)為電信號(hào)。
4、功能特點(diǎn)
(1). 熒光發(fā)射光譜
選擇某一固定波長的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。
(2). 熒光激發(fā)光譜
選定某一熒光發(fā)射波長記錄熒光發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜。
(3).時(shí)間分辨技術(shù);
可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進(jìn)行分辨并分別測量。
時(shí)間分辨熒光測定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)
P0：強(qiáng)度取值
EXP：指數(shù)運(yùn)算符
t：時(shí)間取值
τ：熒光平均時(shí)間壽命
5、產(chǎn)品應(yīng)用
對經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析，可應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化工等部門。
6、主流熒光產(chǎn)品推薦
上海棱光生產(chǎn)的F96系列、F97系列熒光分光光度計(jì);
天津港東生產(chǎn)的F-380型、F-320型、F-280型熒光分光光度計(jì);
天津拓普生產(chǎn)的WFY-28型熒光分光光度計(jì);
上海精密生產(chǎn)的970CRT型熒光分光光度計(jì);
