一、基線平直度的重要性(對分析測試誤差的影響)
紫外可見分光光度計的光度噪聲直接影響儀器的信噪比,它是限制分析檢測濃度下限的主要因素。目前, 各國紫外可見分光光度計的生產(chǎn)廠商, 給出的整機光度噪聲都是指儀器在500nm 處的光度噪聲( 稱之為整機的光度噪聲) , 主要用于比較不同儀器的優(yōu)劣。而紫外可見分光光度計的使用者往往要在不同波長上使用, 特別要在紫外區(qū)使用。所以, 只給出500 nm處的整機光度噪聲, 不能滿足使用者的要求。因此, 提出了基線平直度的概念。紫外可見分光光度計的基線平直度是指每個波長上的光度噪聲, 它是用戶關(guān)心的技術(shù)指標之一。它是紫外可見分光光度計各個波長上主要分析誤差的來源之一。它決定紫外可見分光光度計在各個波長下的分析檢測濃度的下限。但是很可惜, 目前很多儀器制造者、使用者都還沒有認識到或還沒有重視基線平直度這個技術(shù)指標。
二、基線平直度的測試方法
目前, 國際上對紫外可見分光光度計的基線平直度的測試方法一般是冷態(tài)開機, 預(yù)熱0. 5h 后, 試樣和參比比色皿都為空氣, 光譜帶寬SBW = 2 nm, 吸光度值為0Ab s , 從長波向短波方向?qū)x器進行全波長慢速( 或中速) 掃描。而后, 在全波長范圍內(nèi), 找出峰-峰( P-P) 值中大的一點, 作為該儀器的基線平直度。但是目前, 國際上有許多科技工作者不注意這個問題。如日本某紫外可見分光光度計, 給出的儀器波長范圍是190～900nm , 給出的基線平直度BF 為±0. 001Abs。但是筆者經(jīng)測試后發(fā)現(xiàn)該儀器的基線平直度只能在200～800nm 內(nèi)才能保證為± 0. 001Abs。這就意味著該儀器能保證基線平直度為±0. 001Abs的使用波長范圍只能是200～800nm, 這種給基線平直度的方法是不對的。它既偏離了基線平直度的定義(每個波長上的噪聲) , 又會誤導(dǎo)使用者, 認為該儀器在190～900nm 都能達到光度噪聲為±0. 001Abs。特別值得注意的是, 還有的公司把基線平直度和基線漂移混為一談。如國外的某公司,對某紫外可見分光光度計給出了“ 基線漂移為± 0. 002Abs ( 200～ 950nm)”和“ 基線漂移為N/ A” 的技術(shù)指標。顯然, 這里的“ 基線漂移” 指的是基線平直度。而該儀器的波長范圍為190 ～1100 nm, 但對波長范圍為190 ～1100 nm 的儀器, 只給出200～950nm 的基線平直度是不合理的。尤其對某儀器給出的“ 基線漂移為N/ A”, 這種給法更是莫名其妙。另外, 該公司又給出了某紫外可見分光光度計儀器的“ 基線穩(wěn)定性為0. 001Ab s/ h”, 但未給出基線平直度。很顯然, 該公司既未搞清穩(wěn)定性的含義, 又把基線平直度和500 nm處的光度噪聲混為一談了。目前除美國的P-E 等少數(shù)公司以外, 在基線平直度這個關(guān)鍵技術(shù)指標上, 類似上述某公司做法的廠商為數(shù)不少。
三、影響基線平直度的主要因素
(1 ) 濾光片或光學(xué)元件上有灰塵此時會產(chǎn)生散射, 從而引起基線平直度變壞。
(2 ) 濾光片未安裝好用于不同波段不同的濾光片切換時會產(chǎn)生噪聲, 使基線平直度變壞。
(3 ) 光源( 氘燈、鎢燈) 切換時產(chǎn)生噪聲一 般在340 ～360nm 左右出現(xiàn), 從而使基線平直度變壞。
(4 ) 基線平直度測試時掃描速度太快也會使基線平直度變壞。
(5 ) 電子學(xué)方面的噪聲過大也會直接影響基線平直度, 特別是放大器和光電轉(zhuǎn)換元件的噪聲, 對基線平直度的影響更大。
(6 ) 光學(xué)部分未調(diào)整好特別是單色器的光路未調(diào)整好, 會使信號減小,信噪比變小, 使基線平直度變壞。
(7 ) 環(huán)境因素包括振動、電場、磁場干擾、電壓不穩(wěn)等, 都會使基線平直度變壞。
四 、常見錯誤
國內(nèi)外的許多科技工作者, 對紫外可見分光光度計的基線平直度的重要性尚未引起足夠重視, 在基線平直度的運用方面還有許多錯誤。其具體表現(xiàn)
如下:
1. 制造商不給基線平直度
國內(nèi)外許多紫外可見分光光度計的制造商, 根本不給出儀器的基線平直度。
2. 盲目給基線平直度
國內(nèi)外許多制造商, 在給出紫外可見分光光度計的基線平直度時, 千篇一律的寫成±0. 001Abs。
3. 給出錯誤的基線平直度
以上三種作法都是不對的。其理由是: 如果不給基線平直度, 使用者將不知自己所使用的波長上的噪聲或靈敏度, 不便選擇儀器條件。因此, 不易得到佳分析結(jié)果。
五、如何保證或提高儀器的基線平直度指標
1. 設(shè)計者
要從理論上搞清基線平直度的概念、要把基線平直度與整機的光度噪聲真正區(qū)分開來, 并在設(shè)計和使用時都要嚴格控制影響基線平直度的因素。
2. 制造者
要重視基線平直度對整機的影響! 生產(chǎn)中要重視對基線平直度的測試, 研究基線平直度的測試方法, 保證科學(xué)、準確的測出基線平直度。并要在儀器說明書中明確給出整個波段范圍內(nèi)的基線平直度, **不能給出模棱兩可的基線平直度指標。
3. 使用者
要重視基線平直度對分析測試誤差的影響, 要重視對自己所用儀器的基線平直度的檢測, 一旦發(fā)現(xiàn)問題要及時解決。
