β-Actin介紹及其應(yīng)用

內(nèi)參就是內(nèi)部參照，在生物基因表達(dá)檢測(cè)中常常用到內(nèi)參。內(nèi)參主要用來(lái)做參照物校正上樣量。生物試驗(yàn)中常用管家基因作為內(nèi)參，因?yàn)楣芗一蛟诩?xì)胞內(nèi)的組成相對(duì)比較穩(wěn)定，表達(dá)也保持一致。常用的內(nèi)參基因有GAPDH、18sRNA、β-Actin等，下文主要介紹β-Actin的主要特性。

Actin即“肌動(dòng)蛋白”，是細(xì)胞的一種重要骨架蛋白。同時(shí)Actin在細(xì)胞分泌、吞噬、移動(dòng)、胞質(zhì)流動(dòng)和胞質(zhì)分離等過(guò)程中起重要作用。Actin在不同物種之間高度保守，以至于很難獲得較好的針對(duì)actin的抗血清。Actin大致可分為六種，其中四種是不同肌肉組織特異性的，包括α-skeletal muscle actin，α-cardiac muscle actin，α-smooth muscle actin，和γ-smooth muscle actin; 其余兩種廣泛分布于各種組織中，包括β-actin(β-non-muscle)和γ-non-muscle actin。不同的actin之間同源性大于90%，但在N-terminal同源性僅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。

β-Actin

β-Actin是橫紋肌肌纖維中的一種主要蛋白質(zhì)成分，也是肌肉細(xì)絲及細(xì)胞骨架微絲的主要成分。具有收縮功能，分布廣泛。

β-Actin是PCR常用的內(nèi)參，β-Actin抗體是western Blot很好的內(nèi)參指數(shù)。內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Internal Control)，對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白。它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。常用的蛋白質(zhì)內(nèi)參有細(xì)胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)等。因此β-Actin抗體、β-Tubulin抗體以及GAPDH抗體成為常見(jiàn)的三個(gè)動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)參抗體。

β-Actin作為內(nèi)參是得到了公認(rèn)的，這是針對(duì)大多數(shù)組織和細(xì)胞來(lái)說(shuō)的，它廣泛分布于細(xì)胞漿內(nèi)，表達(dá)量非常豐富。Beta-actin由375個(gè)氨基酸組成，分子量大小為42-43kDa左右。

β-actin的蛋白水平通常不會(huì)發(fā)生改變，因此被廣泛用于Western時(shí)上樣量是否一致的參照，也常被用于**染色觀察細(xì)胞的微絲結(jié)構(gòu)。在用作Western的參照時(shí)，Actin抗體和Tubulin抗體的主要不同之處在于兩者所識(shí)別蛋白的分子量不同，這樣可以選擇合適的參照在同一塊膠同一張膜上實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè)目標(biāo)蛋白和參照蛋白。
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近些年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，將管家基因作為內(nèi)參使用也具有一定的缺陷性，例如在不同類(lèi)型的細(xì)胞、處于不同發(fā)育階段的組織或者培養(yǎng)條件不同等情況下，這些管家基因的表達(dá)量往往會(huì)有較大差異，因此在選擇內(nèi)參基因時(shí)，要根據(jù)所研究的實(shí)驗(yàn)情況來(lái)選定表達(dá)比較穩(wěn)定的管家基因作為內(nèi)參。