各種ALEXA FLUOR染料的強大應(yīng)用剖析

本文的內(nèi)容圍繞Alexa Fluor染料的優(yōu)點、Alexa Fluor染料可替代的熒光染料、各種Alexa Fluor 染料的光譜特性，為您展示Alexa Fluor 這一熒光標記試劑明星產(chǎn)品的強大功能和廣泛應(yīng)用潛力所在。

Alexa Fluor 是熒光標記試劑的一大突破，涵蓋了從近紫外、可見光，到近紅外光譜的一系列熒光染料，其代表了熒光標記試劑發(fā)展的一個重大突破，并產(chǎn)生了目前為止我們測試過的，好亮的復(fù)合物。作為新一代染料，Alexa Fluor 染料系列及其復(fù)合物，能為您解決熒光染色常見問題。

Alexa Fluor 的優(yōu)點如下：

? 亮度 — Alexa Fluor 偶聯(lián)物相比其他染料熒光更強。

? 光穩(wěn)定性 — Alexa Fluor 偶聯(lián)物相比其他染料光穩(wěn)定性更強，提供更長的圖像捕獲時間。

? 儀器兼容性 — Alexa Fluor 偶聯(lián)物的吸收光譜與普通激發(fā)光源的主要輸出波長相匹配。

? 多種顏色 — Alexa Fluor 偶聯(lián)物有藍色到紅色的多種直接熒光.

? pH 值不敏感 — Alexa Fluor 染料在一個廣泛的pH 范圍內(nèi)保持強熒光.

? 水溶性 — Alexa Fluor 反應(yīng)性染料有良好的水溶性, 無需有機試劑即可結(jié)合蛋白, 且儲存不易產(chǎn)生沉淀.

Alexa Fluor 染料的光譜特性:

?Alexa Fluor 350— 亮藍和紫外光激發(fā)

Alexa Fluor 350 的藍色熒光比AMCA 亮50%，而且大發(fā)射波長稍短(為442nm ，AMCA 為448nm)，因此更容易與現(xiàn)有的綠色熒光基團區(qū)分。

? Alexa Fluor 405 —近乎**的匹配藍色二極管激光器

Alexa Fluor 405 的激發(fā)/發(fā)射**長為402/421 nm，與近來使用的熒光顯微鏡和流式細胞儀405nm譜線的藍色二極管激光器近乎**的匹配。Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反應(yīng)性衍生物，后者是乙酰疊氮化物。Alexa Fluor 405琥珀酰酯純度更高且有一個4-**羧酸的間隔，使得熒光基團與其偶聯(lián)的生物分子之間的反應(yīng)性小化。

?Alexa Fluor 430—高斯托克斯頻移的430 nm吸收少數(shù) 400nm ~ 450nm 吸收的染料在水溶液中可測熒光偏離500nm。Alexa Fluor 430 彌補了這一缺陷，430nm激發(fā)時發(fā)射在540nm附近。

?Alexa Fluor 488—好的綠色熒光基團

Alexa Fluor 488 偶聯(lián)蛋白優(yōu)于其他熒光素，實驗證明比包括Cy2 的其他綠色熒光基團都好。不僅亮度更高，而且光穩(wěn)定性更好。在pH4～10 保持穩(wěn)定是另一優(yōu)越之處。

? Alexa Fluor 532 —適于532 nm 激發(fā)光源的染料

激發(fā)發(fā)射波長位于綠色熒光Alexa Fluor 488 和橙色熒光的Alexa Fluor 546 之間，適用于雙頻Nd:YAG激光器在內(nèi)的532 nm 激發(fā)光源。

?Alexa Fluor 546—Cy3 和四甲基羅丹明的替代物

Alexa Fluor 546 標記的偶聯(lián)物良好應(yīng)用于橙色范圍光譜，比四甲基羅丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3 熒光更強，容易被汞弧燈激發(fā)，發(fā)射波長546 nm。

?Alexa Fluor 555—優(yōu)于Cy3 的替代物

Alexa Fluor 555 與Cy3 偶聯(lián)物的光譜相匹配，因此適用于Cy3 的濾光器。Alexa Fluor 555 的總熒光更強，且光穩(wěn)定性更好，為研究者提供了更長的圖像捕獲時間。

?Alexa Fluor 568 —適于568 nm 激發(fā)光源

Alexa Fluor 568 的橙紅色熒光適用于激光共聚焦顯微鏡的Ar–Kr 混合氣體激光器，其發(fā)射的譜線為568nm。與具有相似大激發(fā)/發(fā)射波長的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比， Alexa Fluor 568的偶聯(lián)物亮度更高。

? Alexa Fluor 594 —優(yōu)于Texas Red 的替代品

Alexa Fluor 594 偶聯(lián)物發(fā)出紅色光，可與綠色熒光探針一同用于多色標記實驗。比Texas Red 偶聯(lián)物有更高的亮度。

? Alexa Fluor 610—Alexa Fluor 好的紅色染料

Alexa Fluor 610 亮度高、光穩(wěn)定， 可用檢測 Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光學(xué)元件檢測。前身是FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受體染料。新的Alexa Fluor 610 激發(fā)/發(fā)射波長為612/628nm，容易與綠色熒光基團相區(qū)分，適用于多色標記。Alexa Fluor 610 仍為人眼可見，優(yōu)于Alexa Fluor 633和其他更長波長的熒光團。

? Alexa Fluor 633 —光穩(wěn)定性更強

遠紅光染料近來大受歡迎，是因為它們的光譜范圍在大多數(shù)樣品的自發(fā)熒光之外。He–Ne 激光器 633 nm 和紅色二極管激光器635 nm 譜線的廣泛應(yīng)用加速了兼容染料的開發(fā)。Alexa Fluor 633 偶聯(lián)物具有亮度和光穩(wěn)定性，吸收峰在632 nm，發(fā)射峰在650 nm。

?Alexa Fluor 635 —He–Ne 激光器633 nm 線的佳染料

新的 Alexa Fluor 635 染料，其偶聯(lián)物比Alexa Fluor 633 亮度更高，因為它的吸收光譜不會象Alexa Fluor 633、Cy5 和tetramethylrhodamine 那樣分成兩個峰。Alexa Fluor 635 同樣適用于He–Ne 激光器的633 nm譜線和紅色二極管激光器的635 nm 譜線，吸收峰在633 nm，發(fā)射峰在647 nm。

? Alexa Fluor 647 —優(yōu)于Cy5 的替代品

Alexa Fluor 647 與Cy5 偶聯(lián)物的光譜及濾光器相匹配。Alexa Fluor 647 二抗偶聯(lián)物的總熒光亮度高于其他公司的Cy5 偶聯(lián)物。在與大多數(shù)的蛋白質(zhì)、寡核苷酸和核酸結(jié)合時，Alexa Fluor 647 相比Cy5 熒光吸收光譜波動很小，因此在同等程度的替換時發(fā)出的熒光更強。

? Alexa Fluor 680 —Cy5.5 的替代物

Alexa Fluor 680 的激發(fā)峰在679 nm，大發(fā)射為702 nm，與Cy5.5 類似。Alexa Fluor 680 能夠很好的與其他紅色熒光團區(qū)分，如 Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647，是理想的三色與四色標記用染料。

?Alexa Fluor 700 —遠紅光二極管激光器的適染料

Alexa Fluor 700 大吸收在696 nm，能夠被675–700 nm 范圍的氙弧燈、遠紅外二極管激光器或dye-pumped lasers 激發(fā)。發(fā)射光在紅外區(qū)，峰值為719 nm。

?Alexa Fluor 750—Alexa Fluor 長波長的產(chǎn)品

Alexa Fluor 750 是目前的Alexa Fluor 系列產(chǎn)品中波長長的產(chǎn)品，與Cy7 光譜相似。其發(fā)射的**長為779 nm，能夠和Alexa Fluor 647 及allophycocyanin (APC)區(qū)分，適合多色分析。Alexa Fluor 700偶聯(lián)物 752 nm 的大激發(fā)光使其適用于720–750 nm 范圍的氙弧燈或dye-pumped lasers。

成功的實驗都是相似的，不成功的實驗卻各有各的問題所在。每一次的**標記實驗都會或多或少遇到些耽誤進程的問題，希望本篇介紹的Alexa Fluor能夠?qū)崒嵲谠趲湍鷾p輕實驗中的煩惱。