Bio-Rad公司：一步法數(shù)字PCR試劑盒

一步法RT-ddpcr試劑盒(one-step RT-ddPCR kit for probes)的試劑盒讓研究人員能夠**靈敏地測定目標(biāo)RNA分子，應(yīng)用于基因表達分析、miRNA分析和病毒載量定量等方面。與通常的逆轉(zhuǎn)錄之后再對cDNA進行分液不同，如今是先分RNA，再開展逆轉(zhuǎn)錄和PCR，一切都在液滴中進行，這減少了手動操作，降低了污染的可能性。

此試劑盒將逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)與微滴式數(shù)字PCR結(jié)合起來，為RNA的**定量創(chuàng)造了一個新典范。研究人員可將一步法RT-ddPCR試劑盒與QX100微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)結(jié)合使用，測定目標(biāo)RNA拷貝數(shù)的微小差異，而在這之前，定量pcr是無法測定的。

它是如何工作的?

一步法RT-ddPCR試劑盒遵循ddPCR流程，只是它的分液對象不是DNA，而是RNA。樣品被分成20,000個微滴，而目標(biāo)和背景RNA被隨機分布。在逆轉(zhuǎn)錄之后，生成的cDNA被pcr擴增，以便檢測目標(biāo)。每個微滴都帶來了一個陽性或陰性的熒光信號，指示目標(biāo)RNA存在與否。采用微滴分析儀(droplet reader)逐個對每個微滴進行檢測，而軟件計算出每微升樣品中目標(biāo)RNA的濃度。

與QX100微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)聯(lián)合使用，一步法RT-ddPCR試劑盒讓研究人員能夠：

?富集稀有的目標(biāo)RNA序列

?檢測基因表達水平的微小差異

?無需標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定RNA分子的拷貝數(shù)

與傳統(tǒng)的微流體數(shù)字PCR平臺不同，Bio-Rad公司的QX100微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)先對樣品進行微滴化處理。這樣的好處是每個樣品可形成20,000個液滴，而其他系統(tǒng)只能分成760-3,000個部分。分得越多，則意味著分析越準(zhǔn)確。