Bio-Rad公司：一步法數(shù)字PCR試劑盒

一步法RT-ddpcr試劑盒(one-step RT-ddPCR kit for probes)的試劑盒讓研究人員能夠**靈敏地測(cè)定目標(biāo)RNA分子，應(yīng)用于基因表達(dá)分析、miRNA分析和病毒載量定量等方面。與通常的逆轉(zhuǎn)錄之后再對(duì)cDNA進(jìn)行分液不同，如今是先分RNA，再開展逆轉(zhuǎn)錄和PCR，一切都在液滴中進(jìn)行，這減少了手動(dòng)操作，降低了污染的可能性。

此試劑盒將逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)與微滴式數(shù)字PCR結(jié)合起來(lái)，為RNA的**定量創(chuàng)造了一個(gè)新典范。研究人員可將一步法RT-ddPCR試劑盒與QX100微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)結(jié)合使用，測(cè)定目標(biāo)RNA拷貝數(shù)的微小差異，而在這之前，定量pcr是無(wú)法測(cè)定的。

它是如何工作的?

一步法RT-ddPCR試劑盒遵循ddPCR流程，只是它的分液對(duì)象不是DNA，而是RNA。樣品被分成20,000個(gè)微滴，而目標(biāo)和背景RNA被隨機(jī)分布。在逆轉(zhuǎn)錄之后，生成的cDNA被pcr擴(kuò)增，以便檢測(cè)目標(biāo)。每個(gè)微滴都帶來(lái)了一個(gè)陽(yáng)性或陰性的熒光信號(hào)，指示目標(biāo)RNA存在與否。采用微滴分析儀(droplet reader)逐個(gè)對(duì)每個(gè)微滴進(jìn)行檢測(cè)，而軟件計(jì)算出每微升樣品中目標(biāo)RNA的濃度。

與QX100微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)聯(lián)合使用，一步法RT-ddPCR試劑盒讓研究人員能夠：

?富集稀有的目標(biāo)RNA序列

?檢測(cè)基因表達(dá)水平的微小差異

?無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定RNA分子的拷貝數(shù)

與傳統(tǒng)的微流體數(shù)字PCR平臺(tái)不同，Bio-Rad公司的QX100微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)先對(duì)樣品進(jìn)行微滴化處理。這樣的好處是每個(gè)樣品可形成20,000個(gè)液滴，而其他系統(tǒng)只能分成760-3,000個(gè)部分。分得越多，則意味著分析越準(zhǔn)確。