誤區(qū)：凝膠試劑總是修飾我的蛋白
事實(shí)：Nupage? 凝膠試劑實(shí)際上保護(hù)了您的蛋白
更中性pH是關(guān)鍵
tris-甘氨酸凝膠系統(tǒng)的根本缺點(diǎn)是樣品制備過(guò)程中的蛋白降解。在使用pH 6.8的tris-甘氨酸樣品緩沖液時(shí)，樣品在緩沖液中加熱，因tris-甘氨酸的負(fù)溫度系數(shù)導(dǎo)致pH值下降。這終導(dǎo)致蛋白水解。
NuPAGE? 凝膠試劑通過(guò)維持較高的樣品緩沖液pH值，保留了蛋白樣品的完整性(圖1)。NuPAGE? 樣品緩沖液的pH值不會(huì)低于pH 8(即使是加熱到70°C)，因此樣品制備過(guò)程中蛋白樣品不會(huì)降解。
圖1. 看看NuPAGE? 凝膠的與眾不同之處。(A) NuPAGE? 凝膠利用1×MES緩沖液運(yùn)行。(B) tris-甘氨酸凝膠利用tris-甘氨酸/SDS緩沖液運(yùn)行。圖片顯示，與tris-甘氨酸凝膠相比，NuPAGE? 凝膠產(chǎn)生銳利、完整的條帶，代表了未水解的蛋白，特別是在第3、5、7、8和9道。
樣品上樣：(1) Mark12? 未染色標(biāo)準(zhǔn)品，10 μL;(2) 大鼠肝裂解液，10 μg;(3) 溶菌酶，6 μg;(4) Bio-Rad? 寬范圍標(biāo)準(zhǔn)品，1:50稀釋;(5) BSA，6 μg;(6) MagicMark? XP標(biāo)準(zhǔn)品;10 μL;(7)人IgG，6 μg;(8)人IgM，6 μg;(9)大腸桿菌裂解液，10 μg;(10) Novex? Sharp未染色標(biāo)準(zhǔn)品，10 μL。
誤區(qū)：NuPAGE? 凝膠跑得太慢了
事實(shí)：NuPAGE? 凝膠可在250V下跑24分鐘
標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)行步驟
為了獲得有效的分離，傳統(tǒng)Laemmli凝膠需要跑90分鐘。相比之下，NuPAGE? 凝膠的標(biāo)準(zhǔn)步驟則為200V，35分鐘。此外，如果使用加速步驟，僅需24分鐘就能獲得有效分離(250V)。
圖2. 加快運(yùn)行時(shí)間，而不犧牲性能。NuPAGE? 樣品上樣：(1) Mark12? 未染色標(biāo)準(zhǔn)品，10 μL;(2) 大鼠肝裂解液，10 μg;(3) 溶菌酶，6 μg;(4) Bio-Rad? 寬范圍標(biāo)準(zhǔn)品，1:50稀釋;(5) BSA，6 μg;(6) MagicMark? XP標(biāo)準(zhǔn)品;10 μL;(7)人IgG，6 μg;(8)人IgM，6 μg;(9)大腸桿菌裂解液，10 μg;(10) Novex? Sharp未染色標(biāo)準(zhǔn)品，10 μL。
誤區(qū)：預(yù)制膠太貴了
事實(shí)：使用Novex? 預(yù)制膠不僅能節(jié)約時(shí)間和寶貴的樣品，還能節(jié)約經(jīng)費(fèi)
30多年來(lái)傳統(tǒng)的凝膠分離基本沒(méi)變。使用Novex? 預(yù)制膠帶來(lái)以下明顯優(yōu)勢(shì)：
?制備時(shí)間更短——遠(yuǎn)離自己灌膠的麻煩，您可以更快獲得結(jié)果，并進(jìn)入流程中的下一步
?實(shí)驗(yàn)間的一致性更佳——我們的蛋白凝膠經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，能大限度地降低實(shí)驗(yàn)間的差異，幫助您獲得更加準(zhǔn)確的結(jié)果
