如何捕獲低豐度蛋白（二）

在加拿大的多倫多大學(xué)，Andrei Drabovich和Eleftherios Diamandis采用另一種不同的方法來(lái)對(duì)付低豐度蛋白。他們利用組合肽段文庫(kù)(CPL)來(lái)開(kāi)發(fā)分析，這項(xiàng)成果發(fā)表在2010年3月的《JouRNAl of Proteome Research》上。

肽段文庫(kù)幫助標(biāo)準(zhǔn)化樣品中存在的蛋白豐度，從而富集低豐度蛋白，而排除高豐度蛋白。之后，樣品可通過(guò)質(zhì)譜分析。這聽(tīng)上去有些復(fù)雜，不過(guò)記住一點(diǎn)，文庫(kù)中有一種配體能與特異蛋白結(jié)合。Drabovich解釋：“我們假設(shè)有兩種特異蛋白：一種非常高豐度的蛋白和一種非常低豐度的蛋白。當(dāng)我們將這種組合文庫(kù)加入樣品時(shí)，這些配體與蛋白結(jié)合，特異配體的拷貝數(shù)相同。然而，高豐度蛋白將過(guò)飽和配體，因此大部分都不會(huì)結(jié)合，而低豐度蛋白將幾乎全部與配體結(jié)合，因?yàn)榕潴w數(shù)量是相同的?！敝?，經(jīng)過(guò)后一步的洗脫，研究人員將得到相同數(shù)量的高豐度和低豐度蛋白。

利用這種方法，Drabovich尋找了血清、癌細(xì)胞裂解液、以及卵巢癌和前列腺癌患者血液中的低豐度蛋白，試圖找到其他方法無(wú)法發(fā)現(xiàn)的蛋白標(biāo)志物。

Drabovich談到：“這種技術(shù)可回答多個(gè)問(wèn)題，找到診斷、預(yù)后和監(jiān)控**反應(yīng)的生物標(biāo)志物。這是整個(gè)探索過(guò)程的**步。”盡管組合肽段文庫(kù)的理念不能分離某一種特定蛋白，但是能夠富集它們，之后再用質(zhì)譜或其他方法進(jìn)行分析。

利用這種方法，他們?cè)诼殉舶└顾需b定出總共484個(gè)獨(dú)特蛋白，其中216個(gè)為低豐度蛋白。其中74個(gè)蛋白之前未曾描述過(guò)。CPL的處理使得鑒定出的低豐度蛋白要多得多，并為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(mem)分析的開(kāi)發(fā)提供了重要的信息。利用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，他們確定了一組卵巢癌腹水中五種蛋白的相對(duì)量。