電穿孔法——細胞轉(zhuǎn)染的另類選擇

對于細胞轉(zhuǎn)染而言，目前主要是轉(zhuǎn)染試劑(多為脂質(zhì)體)的天下。磷酸鈣轉(zhuǎn)染的方法雖說有些out，但有些細胞還就認準這一套。不過，對于某些**細胞而言，化學方法怎么都不奏效，那我們只能采取強硬手段，用電穿孔的方法進行轉(zhuǎn)染。

應(yīng)用電穿孔時，一般都選擇恒定的電容，然后在不同的場強下轟擊細胞，以摸索佳實驗條件。就大多數(shù)細胞而言，在電穿孔后能有20-50%的細胞存活率就OK，足以保證DNA的成功轉(zhuǎn)染。電穿孔通常在室溫下進行，之后將細胞置于冰上，以延長細胞膜孔道開放的時間。

與傳統(tǒng)的磷酸鈣和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染相比，電穿孔具有操作簡便、轉(zhuǎn)染效率高等諸多優(yōu)點。但它也受多種因素的影響。電壓太低時，細胞膜的改變不足以允許DNA分子通過，而電壓過高時又會造成細胞的損傷。這也就是常說的對細胞毒性大。因此轉(zhuǎn)染時所需的細胞要比其他方法更多。同時，轉(zhuǎn)染時所需的DNA也更多。如果想要穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的話，將DNA線性化后可能效果更好，因為線性DNA更容易整合到基因組DNA上。其他條件如緩沖液、轉(zhuǎn)染溫度等也會對轉(zhuǎn)染效果產(chǎn)生影響。

由于貼壁細胞必須附著在培養(yǎng)瓶的表面才能生長，因此懸浮細胞更易通過電穿孔方法進行轉(zhuǎn)染。不過，不同細胞間的佳轉(zhuǎn)染參數(shù)變異較大，需要不斷摸索。如果有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟用來參考，那就好不過了。

Bio-Rad公司近就新發(fā)布了12種原代細胞和細胞系的電穿孔步驟，幫你節(jié)省了優(yōu)化的時間。這些細胞包括T細胞、嗜中性粒細胞和幾種B細胞**瘤。除了這12種細胞，數(shù)據(jù)庫中還包括了很多常用細胞系如293、3T3、CHO的電穿孔步驟。這些步驟包括了優(yōu)化過的電壓、電容、細胞密度、電轉(zhuǎn)緩沖液等，是在Bio-Rad 公司Gene Pulser Mxcell電穿孔系統(tǒng)和Gene Pulser緩沖液的基礎(chǔ)上進行開發(fā)的。

說到電穿孔，Bio-Rad可是專家。它在1986年就推出了世界上**臺電穿孔儀。Gene Pulser Mxcell電穿孔系統(tǒng)是恒定轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞的有力工具，能轉(zhuǎn)染原代細胞、干細胞和難轉(zhuǎn)染的其他細胞。

除了電穿孔數(shù)據(jù)庫，Bio-Rad還提供了脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)庫和基因槍實驗方法匯總。你可以訪問http://www.biorad.com/genetransferprotocols/來瀏覽Bio-Rad的基因傳輸方案庫。