不少生物過(guò)程都伴隨著蛋白的磷酸化過(guò)程，而蛋白質(zhì)磷酸化的平衡由蛋白激酶和磷酸酶的相互作用達(dá)到。因此，了解這些過(guò)程中的反應(yīng)和調(diào)節(jié)成了不少科研工作者的重頭工作，不過(guò)，羅氏推出的PhosSTOP或許能為您分擔(dān)部分憂愁。
許多生物學(xué)過(guò)程和通路的調(diào)節(jié)都伴隨著磷酸酯的形成和去除;而蛋白的磷酸化狀態(tài)的平衡是由蛋白激酶和磷酸酶相互影響達(dá)到的。為了了解這些通道，大量的研究工作正在制藥公司和研究院所開展。其中一個(gè)重要的步驟就是準(zhǔn)確的觀察一般和特異的磷酸化狀態(tài)，而這就需要對(duì)磷酸化狀態(tài)的有效保護(hù)。
磷酸化的蛋白可以被非特異性的磷酸酶(例如：堿性磷酸酶)，特異性的絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶、酪氨酸蛋白磷酸酶或雙重特異性磷酸酶去磷酸化。這里，我們就一種新的磷酸酶抑制劑混合片的性能做一介紹，稱之為PhosSTOP。PhosSTOP是一種即用型的片劑，其中的一些磷酸酶抑制劑只需要納摩爾級(jí)的量。無(wú)需花費(fèi)漫長(zhǎng)的時(shí)間尋找合適的磷酸酶，也不必繁瑣的稱量和混合。PhosSTOP可同時(shí)持續(xù)抑制包括酸性和堿性磷酸酶，及絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(PP1, PP2A, PP2B)和酪氨酸蛋白磷酸酶在內(nèi)的多種磷酸酶。
一片PhosSTOP可以溶解在10ml的緩沖液中。PhosSTOP具有極好的溶解性，如果需要，可以將2-3片PhosSTOP也可溶解在同樣體積的緩沖液中;相反，也可以選用小體積的緩沖液。溶解后的儲(chǔ)存液體4℃可以穩(wěn)定保存一個(gè)月以上，-20℃下可以保存6個(gè)月。
結(jié)果和討論
磷酸酶無(wú)處不在;依賴于不同的物種、細(xì)胞或組織類型、實(shí)驗(yàn)中使用的特異的細(xì)胞狀態(tài)，磷酸酶的種類和數(shù)量都會(huì)有差異。雖然每種磷酸酶都表現(xiàn)出不同的底物特異性，依賴不同的物種，幾種分離磷酸酶用以測(cè)試抑制效果的范圍。
PhosSTOP可應(yīng)用于多種細(xì)胞提取物中磷酸酶的抑制作用，對(duì)酸性和堿性磷酸酶，絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(PP1, PP2A, PP2B)和酪氨酸蛋白磷酸酶的抑制作用見表2。
磷酸酶活性的檢測(cè)通過(guò)western blots實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，例如，絲氨酸磷酸酶特異性抗體(圖2)。
PhosSTOP片劑可與含有福爾馬林的緩沖液配合兼容使用;適用于福爾馬林固定樣本，保持組織切片中蛋白的磷酸化狀態(tài)。
PhosSTOP片劑蛋白分離過(guò)程中有效保護(hù)蛋白，不會(huì)影響后繼的蛋白檢測(cè)(例如：western blot)或是蛋白濃度檢測(cè) (例如：BCA或是Bradford)。
結(jié)論和討論
PhosSTOP可以方便的保護(hù)磷酸化蛋白免受去磷酸化作用;可持續(xù)抑制包括酸性和堿性磷酸酶，及絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(PP1, PP2A, PP2B)，酪氨酸蛋白磷酸酶及雙特異性磷酸酶在內(nèi)的多種磷酸酶。
PhosSTOP可抑制多種來(lái)源的磷酸酶，包括動(dòng)物，**，植物和酵母細(xì)胞;同時(shí)還可以與含有福爾馬林的緩沖液兼容，適用福爾馬林和石蠟固定的組織切片。
PhosSTOP與cOmplete 蛋白酶抑制劑兼容，實(shí)現(xiàn)對(duì)磷酸酶和蛋白酶的**抑制作用。
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您不再需要花費(fèi)大量的時(shí)間尋找合適的磷酸酶，也不需繁瑣的稱量。PhosSTOP可同時(shí)持續(xù)抑制多種磷酸酶，且具有**的溶解性，并且溶解后的儲(chǔ)存液體可在4℃條件下穩(wěn)定保存一個(gè)月以上。
