聚焦QIAGEN轉(zhuǎn)染試劑

小分子RNA轉(zhuǎn)染

小分子RNA研究一直熱度不減，之前是siRNA，現(xiàn)在是miRNA。于是QIAGEN陸續(xù)推出了多個(gè)小RNA轉(zhuǎn)染產(chǎn)品，包括高通量轉(zhuǎn)染試劑，以及siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的預(yù)混液，讓大家省時(shí)省力，早發(fā)文章。

HiPerFect

HiPerFect是QIAGEN較早推出的小RNA專用轉(zhuǎn)染試劑：這種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子可以在 siRNA低至100 pM濃度的條件下轉(zhuǎn)染(推薦濃度是1 nM-5 nM)，保持高效基因沉默的同時(shí)降低脫靶效應(yīng)，正是這一產(chǎn)品的精髓所在。除了siRNA，HiPerFect還能夠用于miRNA模擬物和抑制劑的轉(zhuǎn)染，滿足miRNA功能分析的需要。

HiPerfect可高效轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞類型，包括HeLa、HeLa S3、HEK 293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC和NHLF等。對(duì)于原代細(xì)胞，產(chǎn)品手冊(cè)中列出了轉(zhuǎn)染原代HUVEC、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的操作步驟，相當(dāng)貼心。

HiperFect轉(zhuǎn)染試劑的方便程度也是****的——你甚至可以在**內(nèi)完成整個(gè)接種到檢測(cè)結(jié)果的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，這對(duì)于高通量反應(yīng)簡(jiǎn)直是求之不得的福音：轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞按比例接種到24孔培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基可以是含有***和血清的，在37度培養(yǎng)箱中保溫。用無血清培養(yǎng)基稀釋siRNA，加入HiperFect轉(zhuǎn)染試劑混勻并溫育5-10min，將混合物逐滴加入培養(yǎng)皿中混勻，培養(yǎng)細(xì)胞直到適當(dāng)?shù)臅r(shí)候檢測(cè)基因沉默效果。**之內(nèi)可以完成再次接種、轉(zhuǎn)染到檢測(cè)結(jié)果!這個(gè)快速操作流程簡(jiǎn)便到還可以用于“反向轉(zhuǎn)染”，方便至極。

就價(jià)格而言，QIAGEN也是越來越平易近人了。在2005年的專題中，HiPerFect 0.5 ml的價(jià)格是2800元，而如今的目錄價(jià)竟然只要1760元。在這個(gè)物價(jià)飛漲的年代，啥東西都是噌噌的往上漲，俺就沒見過降價(jià)的東西，HiPerFect 真是讓人內(nèi)牛滿面啊。QIAGEN還提供0.1 ml的小包裝(詢價(jià))和1 ml包裝(3120元)，當(dāng)然，還有4×1 ml和100 ml的更大包裝，選擇多多。

HiPerFect HTS

QIAGEN還帶來了HiPerFect轉(zhuǎn)染試劑的高通量版本 – HiPerFect HTS Reagent，能夠高通量地轉(zhuǎn)染siRNA/miRNA，適合通路分析、**開發(fā)及miRNA功能研究。對(duì)于高通量實(shí)驗(yàn)而言，操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠和經(jīng)濟(jì)實(shí)惠都很關(guān)鍵。HiPerFect HTS試劑能同時(shí)滿足這幾點(diǎn)。

HiPerFect HTS試劑提供了穩(wěn)定可靠的轉(zhuǎn)染，確保了高通量實(shí)驗(yàn)的一致性和可重復(fù)性。它的操作步驟也有所不同，目的是盡量減少耗材的使用，減少移液步驟，在節(jié)約資源和時(shí)間的同時(shí)也有利于標(biāo)準(zhǔn)化。

說明書中提供了在96孔板和384孔板中反式轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞的操作步驟。在操作過程中，細(xì)胞可在同**接種和轉(zhuǎn)染。具體過程是，siRNA先加入孔中，再加入HiPerFect HTS試劑，在復(fù)合物形成之后，將細(xì)胞加入孔中。

除了塑料耗材的節(jié)省之外，每次轉(zhuǎn)染只使用少量的轉(zhuǎn)染試劑，確保大的經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)也不會(huì)折損結(jié)果的可靠性。HiPerFect HTS試劑本身也有一些優(yōu)勢(shì)，比如批次間一致性高，且稀釋后的穩(wěn)定性高。這些性質(zhì)對(duì)于實(shí)際操作也蠻重要，例如，你可以在早上稀釋，然后用一整天，轉(zhuǎn)染效果也不會(huì)打折。

HiPerFect HTS試劑目前有三種規(guī)格。迷你版(0.1 ml)的試劑適合初實(shí)驗(yàn)，價(jià)格為590元，可用于4-10塊 96孔板。而2×1 ml和6×1 ml的試劑分別為10120元和26560元。當(dāng)然，如果真的用量很大，那應(yīng)該會(huì)有一個(gè)不錯(cuò)的折扣。

FlexiTube siRNA Premix

FlexiTube siRNA Premix 是典型的省時(shí)省力型試劑，它以單管形式提供了您感興趣基因的siRNA以及高效的轉(zhuǎn)染試劑，無需混合，即可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。而傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)需要先稀釋 siRNA，再與轉(zhuǎn)染試劑混合并孵育。相比之下，此預(yù)混液可節(jié)約大量的時(shí)間和勞力。同時(shí)，F(xiàn)lexiTube siRNA Premix的使用也減少了實(shí)驗(yàn)內(nèi)和實(shí)驗(yàn)間的差異，保證了不同實(shí)驗(yàn)間的高度一致性。

此外，F(xiàn)lexiTube siRNA Premix也不僅僅是簡(jiǎn)單的混合，其中試劑與siRNA的比率已預(yù)先優(yōu)化過，確保高的轉(zhuǎn)染效率和基因沉默。你無需優(yōu)化siRNA與試劑的比例，可快速啟動(dòng)RNAi 實(shí)驗(yàn)，避免了冗長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化過程。目前QIAGEN提供了針對(duì)人類和小鼠基因的FlexiTube siRNA Premix。

FlexiTube siRNA Premix中包含的FlexiTube siRNA是利用HP OnGuard siRNA Design 設(shè)計(jì)的，確保其具備高特異性。siRNA的設(shè)計(jì)基于人工智能設(shè)計(jì)程序，并結(jié)合大量的RNAi實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。同時(shí)使用新的序列數(shù)據(jù)庫(kù)及**的同源性分析軟件對(duì) siRNA 的設(shè)計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。

大家肯定關(guān)心轉(zhuǎn)染效率如何，當(dāng)然這也是因細(xì)胞而異的。至于難搞的原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞，你可以嘗試一下加大用量。反之，如果你還想降低siRNA的終濃度，當(dāng)然也可以，只需要使用更少量的FlexiTube siRNA Premix。例如，使用建議量的一半，這樣siRNA的終濃度即為12.5 nM。取決于不同的細(xì)胞類型，有時(shí)siRNA終濃度低至1 nM也能產(chǎn)生高效的基因沉默。

DNA的轉(zhuǎn)染

Attractene

Attractene轉(zhuǎn)染試劑是一種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子，它能夠高效轉(zhuǎn)染各種貼壁細(xì)胞，包括難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞如 HaCaT、MonoMac6和HCT116，也可以用于懸浮細(xì)胞(Jurkat、K562)。經(jīng)過全球多個(gè)國(guó)家的客戶試用，大部分反映轉(zhuǎn)染效果類似或優(yōu)于他們目前正在使用的轉(zhuǎn)染試劑，而且普遍反映其毒性更小。一個(gè)成功的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵因素是看轉(zhuǎn)染試劑沒有細(xì)胞毒性。如果對(duì)細(xì)胞的毒性太大，基因表達(dá)的模式可能改變，結(jié)果會(huì)變得不可靠。如果你現(xiàn)在正面臨轉(zhuǎn)染效率不高或毒性太大，不妨試一下Attractene。而且它的轉(zhuǎn)染步驟經(jīng)過改進(jìn)，是一種“快進(jìn)”模式，接種和轉(zhuǎn)染可以在當(dāng)天進(jìn)行，更節(jié)省時(shí)間。

Attractene轉(zhuǎn)染試劑適合于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，以及DNA和siRNA或miRNA mimics 或inhibitors的共轉(zhuǎn)染。它的規(guī)格有三種：0.1ml、1ml和4×1ml，每次用量約為1.5ul(24孔板)。1 ml的價(jià)格為3250元。

至于PolyFect、Effectene、SuperFect和TransMessenger，之前的專題已經(jīng)詳細(xì)介紹過，請(qǐng)大家看這里(http://www.ebiotrade.com/newsf/2005-8/200589173645.htm)，只是里面的價(jià)格不再適用。大家可以登陸QIAGEN網(wǎng)站查詢現(xiàn)在的價(jià)格。

Qiagen還推出了轉(zhuǎn)染步驟數(shù)據(jù)庫(kù)。你可以通過這個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)找到適合你的細(xì)胞系和培養(yǎng)板/皿大小的轉(zhuǎn)染試劑和專門步驟。點(diǎn)擊http://www.qiagen.com/transfectionprotocols/default.aspx，選擇細(xì)胞系、核酸類型(DNA、mRNA、miRNA或siRNA)、培養(yǎng)形式(6孔板或其他)，就會(huì)彈出Qiagen推薦的轉(zhuǎn)染試劑，和專門的轉(zhuǎn)染步驟，你可以下載或打印，非常方便。這樣可省事多了，能節(jié)約不少優(yōu)化的時(shí)間，還能節(jié)約樣品和試劑。