小分子RNA研究熱度不減，從早先的sirna到目前大熱的miRNA，一波接一波。對(duì)于小分子RNA的轉(zhuǎn)染，大部分研究人員使用的是陽(yáng)離子或兩性分子脂類(lèi)轉(zhuǎn)染試劑。
轉(zhuǎn)染過(guò)程大多很簡(jiǎn)單：混合核酸和轉(zhuǎn)染試劑，等幾分鐘，加到細(xì)胞中，幾天后分析。但是你得做好優(yōu)化的準(zhǔn)備。我們的目標(biāo)是用恰恰好的試劑導(dǎo)入恰恰好的siRNA，在沉默目的基因的同時(shí)又不會(huì)產(chǎn)生脫靶效應(yīng)。但是何謂之恰恰好，這就很難把握。根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型、匯合度、小分子RNA濃度、平板類(lèi)型的不同，轉(zhuǎn)染效率可能差異很大，所以你必須得優(yōu)化。
市場(chǎng)上主流的小RNA轉(zhuǎn)染試劑有Life Technologies的Lipofectamine? RNAiMAX、Qiagen的HiPerFect、Thermo Scientific的DharmaFECT、羅氏的X-tremeGENE siRNA轉(zhuǎn)染試劑及Bio-Rad的siLentFect? 等。此次將它們集合起來(lái)，并奉上參數(shù)和價(jià)格，方便大家比較。
1、產(chǎn)品名：Lipofectamine? RNAiMAX
性?xún)r(jià)比高!
廠家：Life Technologies(invitrogen)
優(yōu)點(diǎn)：較低濃度的RNA分子也能帶來(lái)高的轉(zhuǎn)染效率，在10倍濃度范圍內(nèi)輕松優(yōu)化
簡(jiǎn)介：Lipofectamine? RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是一款RNAi特異的陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑，可以高效地將小分子RNA導(dǎo)入多種細(xì)胞類(lèi)型。盡管Lipofectamine? RNAiMAX的說(shuō)明書(shū)建議以10nM siRNA 作為優(yōu)化干擾效果的起始濃度，但是僅用1nM siRNA 也可以獲得較好的靶基因干擾效果。
Lipofectamine? RNAiMAX 轉(zhuǎn)染試劑可以在10倍的濃度范圍內(nèi)獲得大的干擾效果以及**的細(xì)胞存活率，這個(gè)特點(diǎn)使得Lipofectamine? RNAMAX的轉(zhuǎn)染條件極易優(yōu)化，以便在實(shí)驗(yàn)中使用低的siRNA濃度，從而降低細(xì)胞毒性。不過(guò)，這款試劑只能用于小RNA的轉(zhuǎn)染，不能用于共轉(zhuǎn)染。如果需要共轉(zhuǎn)染，只能借助經(jīng)典的Lipo 2000。
操作流程(順式轉(zhuǎn)染)：用Opti-MEM分別稀釋RNA分子和Lipofectamine RNAiMAX，將兩者混合，室溫下孵育10-20分鐘。加入培養(yǎng)細(xì)胞中，在37°C孵育24-48小時(shí)。
細(xì)胞特異的步驟：可在網(wǎng)站上搜索到，地址為：www.invitrogen.com/RNAi。按照細(xì)胞系名稱(chēng)排列，找起來(lái)還算方便，但DNA和RNA的轉(zhuǎn)染都混在一起，還要仔細(xì)分分，有時(shí)會(huì)眼花。
價(jià)格：4190元/0.75 ml，7200元/1.5 ml(24孔板的每孔建議用量為1 μl)雖然目錄價(jià)看上去貴一些，但實(shí)際用量較省，因此綜合來(lái)看性?xún)r(jià)比較高。
2、產(chǎn)品名：HiPerFect Transfection Reagent 使用方便!
廠家：QIAGEN
優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞存活率高，快速反式轉(zhuǎn)染，適合高通量的RNAi篩選，細(xì)胞特異的步驟詳細(xì)
簡(jiǎn)介：HiPerFect Transfection Reagent是一種陽(yáng)離子和中性脂類(lèi)的獨(dú)特混合物，能實(shí)現(xiàn)高效的siRNA吸收和細(xì)胞內(nèi)siRNA的高效釋放，即便使用低濃度的siRNA，也能產(chǎn)生高的基因knockdown。HiPerFect Transfection Reagent非常適合高通量的反式轉(zhuǎn)染，也適合miRNA研究。
操作流程(傳統(tǒng)步驟)：用不含血清的培養(yǎng)基稀釋siRNA，加入HiPerFect轉(zhuǎn)染試劑，在室溫下孵育5-10分鐘。逐滴加入細(xì)胞，在正常條件下培養(yǎng)，監(jiān)控基因沉默。
細(xì)胞特異的步驟：使用手冊(cè)中詳細(xì)列出了幾大類(lèi)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)步驟，包括貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，以及原代細(xì)胞。例如Jurkat、HUVEC、上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等常用細(xì)胞的轉(zhuǎn)染步驟，無(wú)需在網(wǎng)上費(fèi)力搜索，都可在使用手冊(cè)中輕松找到。另外，還有一些原代細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染的建議。如果你的細(xì)胞未包括在實(shí)驗(yàn)手冊(cè)上，那么可在轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)(www.qiagen.com/TransfectionCellDatabase)中查找，也相當(dāng)方便。
價(jià)格：530元/0.1 ml，1670元/0.5 ml，2960元/1 ml，10450元/4×1 ml(24孔板的每孔建議用量3 μl)
3、產(chǎn)品名：X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent 適合共轉(zhuǎn)染!
廠家：Roche
優(yōu)點(diǎn)：高效轉(zhuǎn)染siRNA，siRNA或siRNA-質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染，靈活性高
簡(jiǎn)介：X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent是一個(gè)基于脂質(zhì)體的、并經(jīng)過(guò)優(yōu)化的轉(zhuǎn)染試劑。雖說(shuō)名字上寫(xiě)著siRNA，但它也能用于siRNA和表達(dá)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染。它能和小干擾 RNA(siRNA)或siRNA/質(zhì)粒DNA混合物形成復(fù)合物，并高效地轉(zhuǎn)入動(dòng)物細(xì)胞，引發(fā)相應(yīng)的基因沉默。相對(duì)較小的細(xì)胞內(nèi)毒性，確保觀測(cè)到的細(xì)胞效應(yīng)僅同轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染的siRNA相關(guān)。有無(wú)血清均可進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后無(wú)需進(jìn)行換液操作。
操作流程：用無(wú)血清Opti-MEM分別稀釋X-tremeGENE siRNA 轉(zhuǎn)染試劑和siRNA，混合并在室溫下孵育15-20分鐘。加入細(xì)胞，監(jiān)控干擾效果。
細(xì)胞特異的步驟：在羅氏的轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)庫(kù)中，可以根據(jù)細(xì)胞名稱(chēng)搜索相關(guān)的轉(zhuǎn)染步驟，使用下拉菜單，比較方便。但網(wǎng)站上沒(méi)有提供具體的步驟，而是鏈接到相關(guān)文獻(xiàn)，需要自己再去找。
價(jià)格：2411元/1 ml，10256元/5×1 ml(24孔板的每孔建議用量為2.5 μl)
4、產(chǎn)品名：DharmaFECT 1、2、3、4 Transfection Reagent 選擇面廣!
廠家：Thermo Fisher Scientific
優(yōu)點(diǎn)：有4種試劑可供選擇，選擇面廣
簡(jiǎn)介：DharmaFECT 的陣營(yíng)為強(qiáng)大，以4敵1，自然占盡上風(fēng)。眾所周知，單一的轉(zhuǎn)染試劑不可能滿(mǎn)足上百種細(xì)胞系對(duì)siRNA的轉(zhuǎn)染要求;因此，Dharmacon通過(guò)對(duì)上百種細(xì)胞系/株逐個(gè)篩選和優(yōu)化，開(kāi)發(fā)出了適合特定細(xì)胞系/株的轉(zhuǎn)染試劑，滿(mǎn)足更大范圍的細(xì)胞系/株對(duì)siRNA的高效轉(zhuǎn)染需求。不過(guò)，一下子來(lái)了四種，選擇起來(lái)也有點(diǎn)麻煩。幸好，Dharmacon根據(jù)客戶(hù)的使用反饋情況收錄了這4種轉(zhuǎn)染試劑對(duì)絕大部分細(xì)胞的成功轉(zhuǎn)染情況，整理成表，供客戶(hù)參考選擇。
操作流程(共轉(zhuǎn)染)：用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋siRNA和DharmaFECT轉(zhuǎn)染試劑，室溫孵育5分鐘，混合后室溫孵育20分鐘，加入無(wú)***的完全培養(yǎng)基。換成轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基，在37°C孵育24-48小時(shí)或更長(zhǎng)。
價(jià)格：1200元/0.2 ml，3300元/0.75 ml，5400元/1.5 ml(24孔板的每孔建議用量為0.25-2.5 μl)
5、產(chǎn)品名：siLentFect? reagent 便宜!
廠家：Bio-Rad 索取資料
簡(jiǎn)介：siLentFect專(zhuān)門(mén)為RNA干擾實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，可將小分子干擾RNA高效轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。 siLentFect**的siRNA 吸附能力和高效的轉(zhuǎn)化效率可以在使用低轉(zhuǎn)染試劑劑量和低siRNA濃度的條件下實(shí)現(xiàn)目的基因的沉默。siLentFect 脂質(zhì)試劑能夠有效地將siRNA 轉(zhuǎn)到很多細(xì)胞系中，包括難于轉(zhuǎn)染的初代細(xì)胞和非標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系如 MCF–7 等。siLentFect 對(duì)siRNA高的吸附能力確保每次實(shí)驗(yàn)使用較少的脂質(zhì)試劑和較少的siRNA 用量，降低了脫靶效應(yīng)的可能性，同時(shí)也減少了花費(fèi)。它也可以用于siRNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染。
操作流程：用無(wú)血清培養(yǎng)基分別稀釋siLentFect轉(zhuǎn)染試劑和siRNA，混合并在室溫下孵育20分鐘。加入細(xì)胞，監(jiān)控干擾效果。
細(xì)胞特異的步驟：暫無(wú)。說(shuō)明書(shū)上只列出了一般的操作步驟，建議以此為起點(diǎn)自行優(yōu)化。
價(jià)格：2275元/0.5 ml，3733元/1.0 ml(24孔板的每孔建議用量為0.75 μl)
轉(zhuǎn)染試劑的比較本身就是一件很難的事情，因?yàn)榧字?，乙之蜜糖，很難評(píng)出一個(gè)綜合**。大家可以根據(jù)有無(wú)細(xì)胞特異的步驟、價(jià)格、共轉(zhuǎn)染等要求來(lái)綜合選擇一個(gè)。希望本文對(duì)您的選擇有小小幫助，也歡迎您將使用情況反饋給我們。
