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提速DNA電泳速度

來自賓夕法尼亞州費城杰佛遜醫(yī)學(xué)院(Jefferson Medical College)外科系,以及Kimmel腫瘤中心(Kimmel Cancer Center)的研究人員申請到了一項新**,這項**也許未來某天會成為dna分析過程中的關(guān)鍵技術(shù),而且這一發(fā)現(xiàn)也可以應(yīng)用于多個領(lǐng)域,比如法醫(yī)鑒定,克隆或者生物恐怖(bioterrorism)。

這一**由約翰霍普金斯醫(yī)學(xué)院助理教授Jonathan Brody博士,以及其同事Scott Kern共同擁有,他們發(fā)明了一種新的技術(shù),能將DNA分離技術(shù),即DNA電泳的速度提高5倍,并降低實驗成本。Brody博士表示,“僅僅通過提高分析的速度,它就能幫助我們每年節(jié)省數(shù)百萬美元?!?/p>

凝膠電泳是一大類技術(shù),被科學(xué)工作者用于分離不同物理性質(zhì)(如大小、形狀、等電點等)的分子。凝膠電泳通常用于分析用途,但也可以作為制備技術(shù),在采用某些方法(如質(zhì)譜(MS)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、克隆技術(shù)、DNA測序或者**印跡)檢測之前部分提純分子。 該技術(shù)操作簡便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度離心法)所無法分離的DNA片段。當(dāng)用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外,還可以從電泳后的凝膠中回收特定的DNA條帶,用于以后的克隆技術(shù)操作。

瓊脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各種形狀、大小和孔隙度。瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近 50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強度和方向恒定的電場下電泳。聚丙烯酰胺分離小片段DNA(5-500bp)效果較好,其分辯力極高,甚至相差1bp的DNA片段就能分開。聚丙烯酰胺凝膠電泳很快,可容納相對大量的DNA,但制備和操作比瓊脂糖凝膠困難。聚丙烯酰胺凝膠采用垂直裝置進行電泳。目前,一般實驗室多用瓊脂糖水平平板凝膠電泳裝置進行DNA電泳。

瓊脂糖DNA是大多數(shù)分子生物學(xué)技術(shù)都要用到的實驗手段,可謂是一種常規(guī)技術(shù),其原理主要是電場中在中性pH值下帶負(fù)電荷的DNA向陽極遷移,線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數(shù)成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難于在凝膠孔隙中蠕行,因而遷移得越慢。

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